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山東譜析GC-17氣相色譜儀檢測野生菱角殼中多糖化合物方法

2020-03-01 16:14:11來源:admin

   山東譜析科學儀器有限公司專業從事高端氣相色譜儀的研發、生產、銷售通。過優化色譜分析方案,對從野生菱角殼中提取分離出多糖及對多糖的單糖組成進行了深進的氣相色譜分析,為進一步開發和利用野生菱角資源提供了科學依據。

   從20世紀60年代以來,人們逐漸發現多糖具有復雜多樣的生物活性和功能,如多糖有免疫調節功能可作為廣譜免疫促進劑,如作為藥物可以治療風濕病、慢性病毒性肝炎、癌癥等;還具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂,促進核酸與蛋白質的生物合成等作用。菱,別名菱角、水菱角、風菱,為菱科菱屬植物烏菱TrapabicomisOsbeck的種子,在我們居住地附近微山湖區有大量的野生或種植。據文獻記載,其果殼、果柄、果、莖及葉柄均可進藥,有健胃止痢、抗癌等作用;還可用于治療胃潰瘍、痢疾、食道癌、子宮頸癌及乳腺癌等。
 
1、樣品、試劑與儀器
 
市售的菱角往仁后,殼曬干,粉碎備用。單糖及雙糖標準物質(半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、乳糖和蜜二糖)均購自ChemService,純度大于98%。所用化學試劑除甲醇和乙醇為色譜純外,其余均為分析純。GC--17氣相色譜儀(山東譜析儀器)。
 
2、實驗方法
(1)多糖化合物的提取及純化方法稱取800g洗凈曬干的菱角殼,加人1:1乙醇-乙醚混合液,65℃水浴回流1~3h往脂;殘渣中加水,9O~100℃水浴提取4~6h,更換凈水反復提取2~3次,合并深紅色多糖提取液,過濾,濃縮。向提取液加人3/7倍體積的乙醇,離心分離沉淀,凍干得多糖粗品F1。向上清液中加人1.0倍體積的乙醇,離心分離沉淀,凍干得多糖粗品F2。依此方法,向上清液中先后加人1.5和4.0倍體積乙醇,分別得到多糖粗品F3和F4。。若直接向原多糖提取液中加人4倍體積的無水乙醇,則得到混合多糖粗品F5。用Sevag法除往多糖粗品中的蛋白質,H2O2法除往色素,透析72h后,濃縮,凍干,即得多糖純品。
 
(2)多糖的水解取多糖樣品10mg于安瓶中加人3moL/L三氟乙酸2mL,密封后在120℃恒溫中水解6h,用氮氣吹干三氟乙酸,加甲醇并吹干,水解產物加進0.6mL0.05mol/LNaOH溶液,再加5mgNaBH4,室溫下反應8—10h,加少許乙酸分解過量的NaBH4,至無氣泡產生為止。蒸干反應液,以酸性甲醇洗滌反應產物,蒸干甲醇液,重復3—4次以除往硼酸根,最后加進甲醇蒸干并于烘箱中105℃除凈水分。
 
(3)乙酰化衍生法取水解得的單糖3mg,加進0.5mL吡啶,1mL乙酸酐,加熱2h,冷卻后加甲苯2mL,用N2吹干,加進氯仿,蒸餾水洗滌,用N2吹干得到棕黃色產物。此乙酰化的單糖醇用CHC13稀釋后進行氣相色譜儀分析。
 
(4)三甲基硅烷化衍生法取水解得的單糖樣品6mg,加吡啶0.6mL,六甲基四硅胺烷0.2mL,三甲基氯硅烷0.2mL,振蕩,靜置,取上清液進行氣相色譜儀析。
 
3、氣相色譜儀分析條件
 
HP-5石英毛細管色譜柱(美國安捷倫公司),(50m×0.22mm×0.25μm);進樣口溫度260℃,接口溫度270℃,載氣氦氣流速1.2mL/min,分流比20:1, 程序升溫:100℃→1O℃/min150℃→15℃/min260℃(40min)。

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